Живильні середовища застосовуються для культивування анаеробів Likar24.ru

Головна » Захворювання нирок » Живильні середовища застосовуються для культивування анаеробів
Ротару :В 70 лет выгляжу на 45 благодаря простой методике...

Почему все аптеки молчат? Грибок ногтя боится как огня дешевого...

Алкоголику вместо кодирования подсыпьте незаметно 3-4 капли обычной…

Соломія Вітвіцька: живіт втягнувся за добу, вийшло 22 кг жиру! Їла це ...

Заросли папиллом на шее и в подмышках - признак наличия у вас...

Живильні середовища застосовуються для культивування анаеробів

Основні принципи культивування бактерій. Методи культивування анаеробів. виділення клітин

Для культивування поза організмом живі клітини можуть бути отримані декількома способами. Клітини можуть бути виділені з крові, але до зростання в культурі здатні тільки лейкоцити. Моноядерних клітини можуть бути виділені з м'яких тканин за допомогою таких ферментів як коллагеназа, трипсин, проназа, що руйнують позаклітинний матрикс [3]. Крім того, в живильне середовище можна помістити шматочки тканин. Клітини, взяті безпосередньо від об'єкта, називаються первинними [4]. Більшість первинних клітин, за винятком пухлинних, мають обмежений термін використання. Після певної кількості поділів клітини піддаються процесу старіння і припиняють ділитися, але життєздатність втрачають. Існують «безсмертні» лінії клітин, здатні розмножуватися нескінченно. Ця здатність є результатом випадкової мутації, або придбана штучно, за допомогою придушення гена теломерази.

Клітини вирощують в спеціальних поживних середовищах, при постійній температурі і в спеціальній газовому середовищі в інкубаторі клітинних культур. Живильні середовища для різних культур клітин розрізняються за складом, pH, концентрації глюкози, складу чинників зростання і ін. Чинники зростання, що використовуються в поживних середовищах, найчастіше отримують з крові. Одним з факторів ризику при цьому є можливість зараження культури клітин пріонами або вірусами. При культивуванні однієї з важливих завдань є виключення або зведення до мінімуму використання заражених інгредієнтів. Однак на практиці це буває досягнуто не завжди. Клітини можна вирощувати в суспензії, або в адгезивному стані. Деякі клітини (такі, як клітини крові) в природних умовах існують в підвішеному стані. Існують також лінії клітин, штучно змінених таким чином, щоб вони не могли прикріплятися до поверхні, це зроблено для того, щоб збільшити щільність клітин в культурі. Для вирощування адгезивних клітин потрібно поверхню, наприклад, культура тканини, або пластик, покритий елементами позаклітинного матриксу для поліпшення зчіпних властивостей, і для стимулювання росту і диференціювання. Більшість клітин з м'яких і твердих тканин Адгезивний. З адгезивного типу культури виділяється органотипових тип культури клітин, який являє собою тривимірну середу, на відміну від від звичайної лабораторного посуду. Цей система культивування фізично і біохімічно найбільш схожа з живими тканинами, але має деякі технічні складності в обслуговуванні (наприклад, потребує дифузії).

Перехресне забруднення клітинних ліній

При роботі з клітинними культурами вчені можуть зіткнутися з проблемою перехресного забруднення.

Особливості вирощування клітин

При вирощуванні клітин, через постійне ділення може виникнути їх надлишок в культурі. В результаті чого можуть виникнути такі проблеми:

Накопичення в живильному середовищі продуктів виділення, в тому числі токсичних.

Накопичення в культурі клітин, що омертвіли, які припинили життєдіяльність.

Скупчення великої кількості клітин робить негативний вплив на клітинний цикл, зростання і ділення сповільнюються, а клітки починають старіти і відмирати (контактна інгібіція росту).

З тієї ж причини може початися клітинне диференціювання.

Для підтримки нормального функціонування культур клітин а також для запобігання негативним явищам періодично проводять заміну живильного середовища, пассажірованіе і трансфекція клітин. Щоб уникнути забруднення культур бактеріями, дріжджами, або іншими лініями клітин, всі маніпуляції зазвичай проводять з дотриманням правил асептики в стерильному боксі. Для придушення мікрофлори в живильне середовище можуть бути додані антибіотики (пеніцилін, стрептоміцин) і протигрибкові препарати (амфотерицин Б).

Одним з продуктів метаболізму в клітинах є кислоти, внаслідок чого pH середовища поступово знижується. Для контролю кислотності поживних середовищ, в них додають індикатори pH. Якщо культура клітин адгезивная, живильне середовище можна повністю замінювати.

Пассажірованіе (поділ) клітин - це відбір невеликої кількості клітин для вирощування в іншому лабораторному посуді. Культуру клітин можна використовувати значно довше, якщо регулярно здійснювати відбір клітинного матеріалу, що дозволяє запобігти передчасному старінню культури внаслідок підвищення щільності заселення клітин. Суспензівное культури пассажіровать простіше, так як для цього достатньо всього лише відібрати необхідну кількість клітин, помістити їх в інші судини, і додати свіжої живильного середовища. Адгезивні ж клітини перед цим слід розділити. Найчастіше для цієї мети використовують суміш трипсину і ЕДТУ або інші ферментні суміші. Невелика кількість роздільних клітин може бути використано для заселення нової культури.

Трансфекція і трансдукція

В клітини при їх вирощуванні можна впроваджувати чужорідну ДНК шляхом трансфекції (невірусні метод). Часто цю технологію застосовують для керованої експресії генів. Порівняно недавно для цих цілей була успішно реалізована трансфекція іРНК.

ДНК також може бути впроваджена в геном клітини за допомогою вірусів або бактеріофагів. Вони, будучи внутрішньоклітинними паразитами, як не можна краще підходять для цих цілей, так як впровадження генетичного матеріалу в клітину-господаря є звичайною частиною їхнього життєвого циклу. Цей метод називається трансдукция.

Використання клітинних культур

Застосовуються також різні методи культивування анаеробів, сутність яких зводиться до видалення кисню з середовища (культивування в анаеростатах, посів уколом в високий стовпчик живильного агару, додавання в живильне середовище речовин, відновлюють кисень, наприклад пирогаллола). Біологічний метод створення безкисневих умов для А. полягає в спільному культивуванні аеробних і анаеробних культур. Для проведення бактеріологічного аналізу на облігатні А. необхідно правильно забирати і транспортувати патологічний матеріал. Так, після пункції його слід доставляти в шприці або в спеціальних транспортних середовищах. Доставка матеріалу на звичайних тампони малоефективна. Ідентифікація А. принципово не відрізняється від ідентифікації аеробів (див. Лабораторна діагностика).

Живильні середовища застосовуються для культивування анаеробів

Для виділення чистих культур патогенних бактерій застосовують оптимальні для їхнього росту поживні середовища з фіксованим рН. Більшість бактерій здатне зростати на різних живильних середовищах; виняток становлять хламідії і рикетсії, не ростуть in vitro поза клітинних культур.

Використовувана поживна середу повинна містити речовини, утилізовані бактеріями для різних біосинтетичних процесів.

Джерела азоту і вуглецю для бактерій

Універсальні джерела азоту і вуглецю - Білкові гідролізати (містять повний набір амінокислот), пептиди і пептони. Універсальні джерела вітамінів і мікроелементів - Екстракти білків тваринного або рослинного походження та білкові гідролізати.

рН живильного середовища

В деяких випадках життєдіяльність бактерій супроводжується зрушенням рН в кислу або лужну сторону, що вимагає внесення до середовища різних буферних систем (зазвичай застосовують фосфатний буфер).

Збалансовані поживні середовища відрізняють висока буферність і стабільний оптимум рН. Важливо також створення оптимальної концентрації 0 2 і С0 2.

Живильні середовища і мікробіологічне дослідження

Інформація, релевантна " Живильні середовища і мікробіологічне дослідження "

Систематика і номенклатура мікроорганізмів. Об'єкти вивчення мікробіології. Прокаріоти (бактерії), їх відмінність від мікробів еукаріотів (найпростіші, гриби) за структурою, хімічним складом, функції. Сучасні підходи до систематики мікроорганізмів. Таксономічні категорії: царство, відділ, сімейство, рід, вид. Внутрішньовидові категорії: біовар, серовар, фаговар, морфовар, культивар.

Розділ 1. Загальна частина Морфологія мікроорганізмів 1. Основні принципи класифікації мікробів. 2. Морфологічні та тинкторіальні властивості бактерій. Методи забарвлення. 3. Структура та хімічний склад бактеріальної клітини. Особливості будови грампозитивних і грамнегативних бактерій. 4. Морфологія грибів. Принципи класифікації. 5. Морфологія найпростіших. Принципи

Джеймс Дж. Плорд (James f. Plorde) Для діагностики інфекційної хвороби потрібно пряме або непряме виявлення патогенного мікроорганізму в тканинах ураженого макроорганізму. У цьому розділі описані основні методи, за допомогою яких це досягається. Пряме мікроскопічне дослідження. Пряме мікроскопічне дослідження тканинних рідин, ексудатів і тканин є одночасно

Пірс Гарднер, Пол М. Арно (Pierce Gardner, Paul M. Arnow) Визначення. Внутрішньолікарняні інфекції, звані також нозокоміальнимі, є важливою причиною захворюваності та смертності. Їх визначають як інфекції, які виникають у хворих після надходження в лікувальний заклад за умови, що в момент надходження у хворого не було клінічних проявів цих інфекцій, і він не

Денніс Л. Кеспер (Dennis L. Kasper) Визначення. Анаеробні бактерії - це мікроорганізми, для зростання яких потрібно низька напруга кисню і які не можуть рости на поверхні щільного живильного середовища в присутності 10% вуглекислоти. Мікроаерофільні бактерії можуть рости при вмісті її в атмосфері в кількості 10%, а також в анаеробних або аеробних умовах. Факультативні

Гаррі Н. Беті, А. Вільям Паскюлль (Harry N. Beaty, A. William Pasculle) Визначення. Це гострі респіраторні інфекції, що викликаються бактеріями, що відносяться до роду Legionella. Типовим представником роду є L. pneumophila. Пневмонія, що викликається цим мікроорганізмом, носить назву хвороби «легіонерів» і служить прототипом всіх інфекцій, викликаних представниками цієї групи. В

Досягнення сучасної анестезіології дозволяють забезпечити стабільний стан основних функцій організму протягом операції. Але після закінчення хірургічного втручання і виходу хворий зі стану наркозу організм породіллі потрапляє в умови, при яких захисні властивості загальної анестезії відсутні і починають діяти больові, токсичні та емоційні чинники. Тому для

Мільйони років тому на Землі з'явилися патогенні мікроорганізми і лише на рубежі XIX-XX ст. був досягнутий вирішальний перелом у боротьбі з хворобами, що викликаються цими мікроорганізмами. Але на порозі 2002 перед медициною постали нові проблеми: погіршення епідеміологічної обстановки по багатьом інфекціям, швидке старіння населення, збільшення людей з імунодефіцитами, що сприяє широкому

Ротару :В 70 лет выгляжу на 45 благодаря простой методике...

Почему все аптеки молчат? Грибок ногтя боится как огня дешевого...

Алкоголику вместо кодирования подсыпьте незаметно 3-4 капли обычной…

Соломія Вітвіцька: живіт втягнувся за добу, вийшло 22 кг жиру! Їла це ...

Заросли папиллом на шее и в подмышках - признак наличия у вас...